Açıkçası pyautogui hakkında pek bir fikrim yok. Sınıf yapısına uyarladım programı. Program çalıştırılınca sonsuz döngüye giriyor. while döngüsü yerine tkinter'in after metodunu kullandım. Durdur fonksiyonu ise destroy metodunu kullanarak programdan çıkış sağlıyor. Siz direkt while yerine after metodu kullanırsanız sorun çözülür muhtemelen.


# karıştırma fonksiyonu
def mikser():
pyautogui.press("1",interval=3.75)
pyautogui.press("2",interval=0.50)
pencere.after(1000, mikser)


#durdurma fonksiyonu
def durdurma():
pencere.destroy()


Edit: OOP silindi.